產品名稱：人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

產品貨號：CellArtis Y30021

產品品牌：TAKARA/ CellArtis

英文(wen)名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

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從開始到結束：人iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

人誘導多能(neng)干細(xi)(xi)胞(bao)（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能(neng)強大(da)的(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)工具和疾病(bing)模型(xing)(xing)，因(yin)(yin)為其(qi)具備增殖(zhi)、自我(wo)更新、分化為多種(zhong)細(xi)(xi)胞(bao)類型(xing)(xing)的(de)(de)能(neng)力。此(ci)外，人iPS細(xi)(xi)胞(bao)還(huan)可(ke)(ke)以再現(xian)細(xi)(xi)胞(bao)來源個體的(de)(de)疾病(bing)表型(xing)(xing)和基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)型(xing)(xing)。將人iPS細(xi)(xi)胞(bao)結合基(ji)(ji)(ji)于CRISPR/Cas9的(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)編輯技術，可(ke)(ke)以在同基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)系中研(yan)(yan)究(jiu)特(te)定基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)改變引起(qi)的(de)(de)功能(neng)影響，因(yin)(yin)為基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)編輯過(guo)的(de)(de)人iPS細(xi)(xi)胞(bao)能(neng)提供可(ke)(ke)再生的(de)(de)、無遺傳變異的(de)(de)患病(bing)細(xi)(xi)胞(bao)和健康細(xi)(xi)胞(bao)資源。

CRISPR/Cas9系統已經(jing)成為一(yi)個(ge)強大的(de)基(ji)因(yin)編(bian)輯(ji)(ji)工具(ju)，因(yin)為其高(gao)的(de)靶向特(te)異性(xing)，編(bian)輯(ji)(ji)效率和易用(yong)性(xing)。該(gai)技術的(de)強大主要源(yuan)于(yu)它(ta)的(de)簡單，因(yin)為全部只(zhi)需(xu)要一(yi)個(ge)Cas9核酸酶(mei)結合一(yi)個(ge)單鏈向導(dao)RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可(ke)以(yi)決定靶向特(te)異性(xing)（Jinek et al. 2012)。這(zhe)種RNA編(bian)程(cheng)的(de)（RNA-programmable）方法(fa)利用(yong)了非同(tong)源(yuan)末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修(xiu)復途徑的(de)易錯特(te)性(xing)，進而產生基(ji)因(yin)敲(qiao)除(通(tong)過插入(ru)/刪除)。這(zhe)種方法(fa)也(ye)可(ke)以(yi)通(tong)過同(tong)源(yuan)重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用(yong)于(yu)基(ji)因(yin)敲(qiao)入(ru)。

CRISPR/Cas9系(xi)統(tong)的(de)組(zu)件可(ke)以(yi)通過多種(zhong)方(fang)法成(cheng)功導(dao)入至靶(ba)細(xi)胞，包括(kuo)基(ji)于(yu)載(zai)體的(de)表達系(xi)統(tong)，RNA轉染(ran), 導(dao)入Cas9/sgRNA核(he)糖核(he)蛋白(bai)（ribonucleoprotein，RNP)復合物(Sander and Joung 2014)等。與基(ji)于(yu)載(zai)體的(de)方(fang)法相比，直接導(dao)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種(zhong)快速(su)轉入基(ji)因編(bian)輯實驗的(de)方(fang)法，同(tong)時脫靶(ba)效應的(de)可(ke)能性更小（Kim et al. 2014)。

一旦(dan)Cas9/sgRNA RNP復合物被(bei)(bei)導入(ru)，為(wei)了(le)分(fen)離(li)和(he)(he)(he)篩選感興趣的(de)(de)基(ji)因(yin)型，單(dan)(dan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)必須被(bei)(bei)分(fen)離(li)并(bing)擴增為(wei)克(ke)隆細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)系。傳(chuan)統上,從基(ji)因(yin)編(bian)輯的(de)(de)hiPS細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)建立(li)一個(ge)(ge)克(ke)隆群(qun)是(shi)(shi)低效的(de)(de)、具有挑(tiao)戰性(xing)的(de)(de)和(he)(he)(he)耗時的(de)(de)，因(yin)為(wei)hiPS 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)是(shi)(shi)以集(ji)落(luo)生長(chang)和(he)(he)(he)傳(chuan)代的(de)(de)。通(tong)常，這會(hui)導致(zhi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)死(si)亡(wang)和(he)(he)(he)提前分(fen)化。然而，Cellartis單(dan)(dan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)克(ke)隆系統包含一個(ge)(ge)成(cheng)分(fen)確定的(de)(de)培(pei)養(yang)系統(由基(ji)礎培(pei)養(yang)基(ji)，包被(bei)(bei)劑，和(he)(he)(he)添加劑組成(cheng))，用于(yu)有效形(xing)成(cheng)單(dan)(dan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)克(ke)隆和(he)(he)(he)擴增基(ji)因(yin)編(bian)輯后的(de)(de)hiPSC克(ke)隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是(shi)(shi)一個(ge)(ge)基(ji)于(yu)單(dan)(dan)層培(pei)養(yang)的(de)(de)系統，規避了(le)集(ji)落(luo)狀培(pei)養(yang)帶來的(de)(de)挑(tiao)戰，允許(xu)單(dan)(dan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)傳(chuan)代和(he)(he)(he)促進接種(zhong)的(de)(de)單(dan)(dan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)存活(huo)和(he)(he)(he)后續(xu)擴增。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完(wan)整的(de)，在無(wu)飼養(yang)層和成(cheng)分確定(ding)條件下，用于(yu)hiPSCs有(you)效擴(kuo)(kuo)增和擴(kuo)(kuo)大生產的(de)系統。試劑盒包含了從接(jie)種單(dan)細胞至(zhi)96孔板(ban)到擴(kuo)(kuo)增至(zhi)48孔板(ban)過(guo)程中所有(you)必要(yao)的(de)試劑。單(dan)細胞克隆擴(kuo)(kuo)增后，hiPSCs可(ke)以(yi)使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培(pei)養(yang)。

產品特點：

1.成分確定的，無血清，無飼養層培養

2.All-In-One型: 培養(yang)基+添加劑(ji)+包被(bei)劑(ji)維持良好的(de)多能性(xing)狀(zhuang)態，背景分化低

3.細胞(bao)(bao)非集落狀均勻(yun)生長，輕松單細胞(bao)(bao)傳代(dai)

4.單個(ge)干細(xi)胞(bao)基因(yin)操(cao)作實驗的(de)理想選(xuan)擇

產品名稱：人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

產品貨號：CellArtis Y30021

產(chan)品品牌：TAKARA/ CellArtis

英文名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

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