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RNA降解的常見原因,如何防止RNA降解

更新時間:2023-11-01

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RNA降解(jie)(jie)是(shi)(shi)一個常見的(de)問題(ti),特別是(shi)(shi)在進(jin)行(xing)RNA提(ti)取和下(xia)游分析時。以下(xia)是(shi)(shi)導致RNA降解(jie)(jie)的(de)一些常見原(yuan)因及(ji)其相應的(de)解(jie)(jie)決方案:

  1. 新鮮細胞(bao): 裂(lie)解(jie)(jie)液不足會導(dao)致裂(lie)解(jie)(jie)不充(chong)分(fen),從(cong)而使部分(fen)RNA未被(bei)釋(shi)放(fang)出來。為了確保RNA釋(shi)放(fang)出來,應在裂(lie)解(jie)(jie)過(guo)程中加入足夠的裂(lie)解(jie)(jie)液。

  2. 新鮮組(zu)織: 若組(zu)織中含有內源性核(he)酸酶,則很難避免RNA酶的(de)(de)降解(jie)。建議采(cai)用(yong)的(de)(de)方法是在液(ye)氮(dan)條件下將組(zu)織研磨,并且,在勻漿時采(cai)用(yong)更(geng)多的(de)(de)裂解(jie)液(ye)。

  3. 冷凍樣品: 如果樣品未(wei)經液氮速冷直(zhi)接轉移(yi)到(dao)-70℃冰箱存(cun)放(fang)(fang),會(hui)使RNA緩慢降解。為了(le)避免這種情況(kuang),應在(zai)樣品取材后(hou)迅(xun)速置于(yu)液氮中冷凍存(cun)放(fang)(fang),然后(hou)轉移(yi)到(dao)-70℃冰箱存(cun)放(fang)(fang)。

  4. 外(wai)源(yuan)RNA酶的污(wu)染: 實驗試(shi)劑、器械等(deng)實驗用(yong)品應采用(yong)DEPC水滅菌處理(li),以(yi)消除外(wai)源(yuan)RNA酶的污(wu)染。

  5. 內(nei)源(yuan)(yuan)RNA酶的(de)污染(ran): 抑(yi)制(zhi)劑(ji)失(shi)效或者(zhe)用量不夠,以及實驗樣品(pin)過(guo)多(duo)或勻漿溫度(du)過(guo)高都可(ke)能導致(zhi)內(nei)源(yuan)(yuan)RNA酶的(de)污染(ran)。為了(le)減少內(nei)源(yuan)(yuan)RNA酶的(de)影響,可(ke)適當(dang)增加抑(yi)制(zhi)劑(ji)的(de)濃(nong)度(du),確保樣品(pin)處(chu)理時處(chu)于適宜(yi)的(de)溫度(du)。

  6. 長時間暴露于高溫或(huo)光照(zhao)環(huan)境(jing)(jing)下: RNA容易受到(dao)紫(zi)外(wai)線和高溫的影響而發生降解,因此在(zai)實驗過程中應(ying)避免樣品暴露于高溫或(huo)光照(zhao)環(huan)境(jing)(jing)下。

  7. 提取(qu)過(guo)程中的反復冷凍解(jie)凍: 這種情(qing)況會破壞RNA結(jie)構,使其(qi)更容易受到酶的作用而降解(jie)。因(yin)此,在RNA提取(qu)過(guo)程中應盡量(liang)減(jian)少冷凍解(jie)凍次(ci)數(shu),最好(hao)一次(ci)性(xing)完成整(zheng)個(ge)提取(qu)過(guo)程。


產品名(ming)稱(cheng):PAXgene全血RNA管 樣本(ben)采集保存
產品貨(huo)號:762165
產品規格(ge):2.5mL,100支/盒

PAXgene血(xue)液(ye)RNA管(guan)旨在(zai)立即(ji)穩(wen)定細(xi)胞(bao)內(nei)RNA,從而產生(sheng)準確且(qie)可(ke)重復的基(ji)因表達數據。PAXgene血(xue)液(ye)RNA管(guan)含有一(yi)種專(zhuan)有試劑,可(ke)在(zai)采集(ji)后(hou)立即(ji)穩(wen)定細(xi)胞(bao)內(nei)RNA。細(xi)胞(bao)內(nei)RNA在(zai)室(shi)溫下穩(wen)定長達三天或在(zai)2-8°C下穩(wen)定長達五天。PAXgene試管(guan)可(ke)以(yi)(yi)在(zai)-20°C至-70°C的溫度下冷凍,以(yi)(yi)便長期(qi)儲存。