用(yong)層析法(fa)，電泳法(fa)，免(mian)疫化學的(de)方(fang)(fang)法(fa)對蛋(dan)白樣(yang)本(ben)進(jin)行分(fen)離或分(fen)析前通常需要先進(jin)行蛋(dan)白定(ding)量(liang)。用(yong)比(bi)色(se)(se)法(fa)進(jin)行蛋(dan)白定(ding)量(liang)分(fen)析的(de)試劑(ji)通常分(fen)為兩類(lei)(lei)：一(yi)類(lei)(lei)是間接檢測(ce)法(fa)，即(ji)檢測(ce)與蛋(dan)白螯合后被(bei)還原銅離子(zi)；另一(yi)類(lei)(lei)是直接檢測(ce)法(fa)，即(ji)使(shi)用(yong)與蛋(dan)白結合的(de)染料(liao)，檢測(ce)樣(yang)品中(zhong)顏色(se)(se)的(de)變化。所有(you)的(de)檢測(ce)方(fang)(fang)法(fa)都要適用(yong)于應用(yong)的(de)適用(yong)性。每種(zhong)檢測(ce)方(fang)(fang)法(fa)都有(you)它的(de)局限和優(you)勢(shi)，出(chu)于復雜的(de)研發需要，以(yi)G-Biosciences公司為(wei)代(dai)表的(de)生物科技公司開發(fa)出(chu)了(le)(le)多種蛋(dan)白定量(liang)試(shi)(shi)劑盒。這些試(shi)(shi)劑都是熟悉的(de)、穩定的(de)方法(fa)，并且能夠提供一致可靠的(de)結(jie)(jie)果，包括增強的(de)染(ran)料結(jie)(jie)合蛋(dan)白定量(liang)，基于銅(tong)離子的(de)蛋(dan)白定量(liang)，創(chuang)新的(de)測試(shi)(shi)條和點蛋(dan)白定量(liang)。總體而言，這些方法(fa)代(dai)表了(le)(le)目前的(de)比色法(fa)檢測和總蛋(dan)白定量(liang)的(de)技術水平。

四大金(jin)剛之-BCA蛋白(bai)定(ding)量(liang)

BCA蛋白定量法是一(yi)種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測(ce)定方法, 也叫史密(mi)斯分(fen)析定量，和去(qu)污劑(ji)溶(rong)解的(de)蛋白溶(rong)液(ye)都是兼容(rong)的(de)。

BCA蛋(dan)白定量法(fa)基于(yu)2個(ge)反應(ying)。首先，蛋(dan)(dan)白樣品中(zhong)的(de)肽鍵還(huan)(huan)原二價銅(tong)離子為一價銅(tong)離子，這是(shi)一個(ge)溫度依賴的(de)反應(ying)。被還(huan)(huan)原銅(tong)離子的(de)量和溶(rong)液中(zhong)的(de)蛋(dan)(dan)白的(de)量成正(zheng)比。下(xia)一步，Cu+與BCA試劑(ji)形(xing)成紫顏色的絡合物，測(ce)定其在562nm處的吸(xi)收值，在0.02-2mg/ml濃(nong)度(du)范(fan)圍內有較好的(de)線性(xing)關系，并與標(biao)準曲線對比，即可計算待測蛋(dan)白的濃(nong)度。 

BCA蛋(dan)白定(ding)量分析適(shi)合在 1ml比(bi)色(se)皿或微(wei)孔板的蛋白溶液定量。試劑盒可(ke)以提供傳統(tong)的BSA蛋白標準(zhun)物或(huo)非動物蛋白標準(zhun)物。對(dui)于稀釋的低濃度的蛋白樣品（0.5-20µg/ml），筆(bi)者推薦使用微(wei)量BCA蛋白(bai)定量(liang)分析試(shi)劑盒。對(dui)于(yu)含有還原劑的樣品，推薦(jian)你使用BCA-還原(yuan)劑兼容型蛋白定(ding)量分析試劑盒。

BCA的(de)優勢是：

l 靈敏度高(gao)的顯色檢測

l 蛋(dan)白濃度檢測范(fan)圍20-2,000µg/ml

l 與多數(shu)離(li)子和(he)非離(li)子型去污劑兼(jian)容

l 方便的微孔(kong)板(ban)和1ml比(bi)色皿檢測形式

四大(da)金剛之(zhi)-CB-X蛋(dan)白定(ding)量

對于科研人員來說，從市場(chang)上大量的(de)蛋(dan)白(bai)定量產品中選(xuan)擇可以和自己的(de)樣本兼容(rong)的(de)試劑盒(he)是一(yi)個難題。CB-X蛋白(bai)定量分(fen)析試劑盒解決了這(zhe)個(ge)難題，因為它和常規使用的緩沖液以及蛋白(bai)分(fen)離(li)，儲(chu)存盒檢測的條件(jian)都(dou)是兼容的。

對(dui)于(yu)簡單不復(fu)雜的水質緩沖液蛋白樣本，CB-X是一(yi)個高度靈敏的(de)(de)，單個試劑的(de)(de)檢測，5分鐘(zhong)可以完成實驗。CB-X蛋白定量分析試(shi)劑(ji)盒使用一個改進(jin)版的考馬斯亮藍染料。

對(dui)于復雜的蛋(dan)白樣本(ben)，CB-X蛋白(bai)定(ding)(ding)量(liang)分析試劑(ji)(ji)(ji)盒帶有能夠去(qu)除干擾準(zhun)確蛋白(bai)定(ding)(ding)量(liang)的(de)(de)試劑(ji)(ji)(ji)和化學品從而來回(hui)(hui)收樣本的(de)(de)必(bi)需試劑(ji)(ji)(ji)。這些干擾試劑(ji)(ji)(ji)包括去(qu)污劑(ji)(ji)(ji)，離液劑(ji)(ji)(ji)，還原劑(ji)(ji)(ji)，烷化劑(ji)(ji)(ji)，糖，高鹽濃度(du)，緩沖液試劑(ji)(ji)(ji)，螯(ao)合劑(ji)(ji)(ji)。去(qu)雜(za)回(hui)(hui)收步驟和隨后的(de)(de)蛋白(bai)定(ding)(ding)量(liang)分析實(shi)在同一個(ge)管中完成保證沒有蛋白(bai)的(de)(de)丟失和蛋白(bai)定(ding)(ding)量(liang)的(de)(de)準(zhun)確性。

如果這個(ge)蛋白(bai)(bai)樣(yang)本(ben)(ben)不包含干擾試劑可以(yi)直接進(jin)行(xing)(xing)單個(ge)試劑定量分析同(tong)時可以(yi)得到一個(ge)線性(xing)反(fan)應。如果干擾試劑存在或者產生人為的結果這時蛋白(bai)(bai)樣(yang)本(ben)(ben)可用去雜回收(shou)試劑進(jin)行(xing)(xing)一步處理，然(ran)后進(jin)行(xing)(xing)蛋白(bai)(bai)定量來(lai)產生線性(xing)的反(fan)應。

CB-X蛋白定量分析試劑盒同時提供一個批次特(te)定性的(de)CB-X查詢表格，這可以(yi)讓科研人(ren)員進(jin)行單個(ge)蛋白(bai)的(de)回收，然(ran)后(hou)定量，之后(hou)在CB-X查詢(xun)表格上通過吸(xi)收值(zhi)來得到(dao)蛋白的濃度。CB-X查詢表格消除了所需要的蛋白標準，節省的大量的時間和精力(li)。CB-X查詢表格(ge)是通過復雜的蛋(dan)白(bai)混合(he)物(wu)制成，和(he)來自于哺乳動物(wu)，植物(wu)，細菌(jun)和(he)酵母的蛋(dan)白(bai)數據可以(yi)很(hen)好的吻合(he)。一(yi)套牛血清(qing)白(bai)蛋(dan)白(bai)標(biao)準物(wu)一(yi)起(qi)提供(gong)，當科研人員單(dan)獨使用CB-X染料(liao)，或者(zhe)他們傾(qing)向于得到自己的(de)標(biao)準(zhun)曲線(xian)或得到在自己特定(ding)的(de)試驗(yan)下的(de)CB-X查詢表格時(shi)，這套標準(zhun)物用于產生標準(zhun)曲線。CB-X蛋白定量分析試劑盒(he)在每(mei)個檢測0.5-50微克的(de)時候是(shi)非(fei)常可靠(kao)的(de)。試劑(ji)盒包含足夠的(de)CB-X檢測(ce)染(ran)料(liao)來進(jin)行500次蛋白(bai)定量以(yi)及足夠的(de)回(hui)收試劑用于250次回收。

CB-X檢測的優勢：

l 0.5-50微克(ke)的(de)線性反應

l 迅速沉淀和(he)顏色反(fan)應

l 效期(qi)長，可以有12個月穩定保存

l 高(gao)度的可靠性(xing)和重復性(xing)

四(si)大金剛之-RED 660蛋(dan)白定(ding)量

去污劑和(he)還原(yuan)劑兼(jian)容的蛋白(bai)定(ding)量

RED 660蛋白定量(liang)檢測(ce)(ce)是基(ji)于(yu)一種試劑(ji)的顯色反應(ying)，它的效果要優于(yu)其他商(shang)業化的顯色反應(ying)定量(liang)檢測(ce)(ce)，包(bao)括Bradford和增強的Coomassie/ Bradford定(ding)量檢測。RED 660蛋(dan)白定(ding)量檢測為您帶來更(geng)好(hao)的(de)線性，更(geng)好(hao)的(de)顏色穩(wen)定(ding)性，以及和(he)考馬斯法相比對于(yu)去污劑(ji)，還原劑(ji)和(he)其他干擾試(shi)劑(ji)更(geng)好(hao)的(de)兼容(rong)性。這種單個的(de)即用的(de)試(shi)劑(ji)可以為您迅速分析總蛋(dan)白濃度和(he)產生(sheng)高度可重(zhong)復性的(de)結果。

這種檢(jian)測(ce)適(shi)用于簡單和快速的蛋(dan)白定(ding)量，可以檢(jian)測(ce)蛋(dan)白濃度在(zai)50-2000μg/ml的濃度范圍內。

這種檢測是基于單(dan)個染料金屬復合物試劑。蛋白和染料金屬復合物的結合是在酸性的條件下從而產生顏色的變化，從紅棕色變為綠色，顏色密度的變化和蛋白濃度呈正比，顏色的變化是染料金屬復合物在低PH值下(xia)去質子化的結果(guo)，這個過程通過和正電荷(he)的氨(an)基酸基團反(fan)應下(xia)完(wan)成(cheng)的。蛋白定量可以使用少(shao)至0.5微克(ke)的蛋白，蛋白染料(liao)復合物可以(yi)在5分鐘(zhong)內(nei)達到反應終點，同時可(ke)以在幾天內(nei)保(bao)持穩(wen)定。

RED 660蛋白(bai)定量試劑盒(he)提供500個標準檢測或(huo)者2500個標準微孔檢測(ce)。RED 660蛋(dan)白定量(liang)試(shi)劑盒和大部分去污劑兼容，它的(de)兼容性可以(yi)被Neutralizer™進一步增強。Neutralizer™是(shi)一種*的化學物質，它能夠隔絕(jue)離子去污劑，包(bao)括SDS，使溶(rong)液和(he)RED 660蛋白定量試劑兼容。Neutralizer™也可以和Laemmli上樣緩沖液一起(qi)使用。

對于蛋(dan)白定量的干(gan)擾

兼(jian)容于RED 660蛋白定量的(de)試(shi)劑以及這(zhe)些試(shi)劑在(zai)標準(zhun)檢測種所接受的(de)濃(nong)度被列(lie)了出來(lai)。在(zai)大部分情況下使用一個校準(zhun)的(de)空白對照可以消除或減少由(you)干擾試(shi)劑所導致的(de)錯誤。

*表明這(zhe)種試劑和RED 660蛋白定量一起使用所接(jie)受的(de)濃度是配套Neutralizer™一(yi)起使(shi)用(yong)。

RED 660蛋白定量優勢(shi)：

l 迅速(su)，單個試劑檢(jian)測

l 兼(jian)容性好，和一系列(lie)去污劑和還原劑兼(jian)容

l 線性好，和(he)其他蛋(dan)白(bai)定量(liang)方法相比有(you)更好的線性標準曲線

四大金剛之-Non-Interfering™（NI）無(wu)干擾蛋白(bai)定量

保證蛋白定量不受干擾試劑的(de)影響。

一種(zhong)(zhong)高(gao)度靈敏的，顯色法的蛋(dan)白(bai)定量方法，這種(zhong)(zhong)檢測(ce)(ce)克服(fu)了常規實驗室試(shi)劑(ji)存在(zai)于蛋(dan)白(bai)溶液中對蛋(dan)白(bai)定量的干擾(rao)，同時顯示出最(zui)小(xiao)的蛋(dan)白(bai)和蛋(dan)白(bai)之間(jian)的檢測(ce)(ce)波動(dong)性。

這種定量方(fang)法(fa)不受常規(gui)(gui)實驗試(shi)(shi)劑存在的影響，比(bi)如還原(yuan)劑，螯合試(shi)(shi)劑，去污劑，氨試(shi)(shi)劑，糖，離液劑，鹽類，藥物，抗(kang)體，鈷和其他常規(gui)(gui)實驗室試(shi)(shi)劑。NI蛋白(bai)定量法由兩步組成。

通用蛋白沉淀試劑(UPPA™)加到(dao)蛋(dan)白溶(rong)液中來(lai)迅速(su)沉淀總蛋(dan)白。蛋(dan)白通過離心(xin)得(de)到(dao)固(gu)定以及干擾試劑在(zai)上清(qing)液中從而被丟棄。

蛋白濃度得(de)到定量(liang)通過和堿性(xing)銅離子溶(rong)液進行混合，銅離子結(jie)合到肽的(de)主(zhu)鏈上，定量(liang)檢測未結(jie)合的(de)銅離子。檢測和蛋白的(de)側鏈無(wu)關從(cong)而使蛋白之間的(de)波動性(xing)可(ke)以最小化(hua)。顏色深度和蛋白的(de)量(liang)成反比。

Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定(ding)量(liang)優(you)勢：

l 線性反應(ying)0.5μg-50μg蛋白

l 少(shao)量樣本即可，只需1-50μl

l 不受非蛋白化(hua)學品和試劑的影(ying)響(xiang)

l 實驗時間，大約(yue)30分(fen)鐘

l 產品效期(qi)長，可以(yi)存放一(yi)年(nian)

常用的蛋(dan)白(bai)定量產品的選擇：

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