從導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可將轉染分為瞬時轉染和穩定轉染。

瞬時轉染（transient transfection）：指將構建好的(de)質粒通過某種方式導入(ru)到(dao)(dao)哺乳動物細(xi)胞內，該質粒上(shang)的(de)外源基因(yin)(yin)(yin)(yin)不整(zheng)合到(dao)(dao)細(xi)胞自身的(de)基因(yin)(yin)(yin)(yin)組上(shang)。瞬時轉染的(de)基因(yin)(yin)(yin)(yin)表達是快速(su)且短暫(zan)的(de)，通常只能維持幾天。這種轉染方式主要用于(yu)快速(su)檢測基因(yin)(yin)(yin)(yin)功(gong)能或蛋白質表達，例如了解基因(yin)(yin)(yin)(yin)沉默、抑制性(xing)RNA和小規模(mo)蛋白質生產等。

穩定轉染（Stable transfected）：將(jiang)外(wai)源DNA整(zheng)合到宿主細胞的(de)基(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)中，這(zhe)種整(zheng)合過(guo)程需要(yao)更長(chang)時間(jian)和更復雜的(de)操作。穩定轉(zhuan)染后的(de)基(ji)因(yin)(yin)表(biao)(biao)達是(shi)長(chang)期(qi)且穩定的(de)，因(yin)(yin)為外(wai)源基(ji)因(yin)(yin)會被傳(chuan)遞給子代(dai)細胞。這(zhe)種轉(zhuan)染方式主要(yao)用于(yu)長(chang)期(qi)表(biao)(biao)達目(mu)標基(ji)因(yin)(yin)的(de)實驗，例如生(sheng)產重組(zu)(zu)蛋(dan)白、進(jin)行(xing)基(ji)因(yin)(yin)敲(qiao)除(chu)或(huo)敲(qiao)入(ru)等(deng)研(yan)究。穩定轉(zhuan)染也用于(yu)藥物篩選、研(yan)究形態變化(hua)、抗(kang)生(sheng)素耐藥性(xing)等(deng)領(ling)域(yu)。

細胞轉染通常可分為三類途徑分別為物理介導、化學介導和生物介導。

物理介導：電穿孔法、顯(xian)微(wei)注射(she)和基因槍等

化(hua)學介導：如(ru)經(jing)典的(de)磷酸鈣共沉淀法(fa)、脂質體轉染方法(fa)和多種陽離子物(wu)質介導技術等

生物介導：病毒(du)介導，逆轉(zhuan)錄病毒(du)、腺病毒(du)等

問題來了，該怎么選擇合適的轉染方法呢？

小編(bian)對(dui)這三個(ge)途徑的常用方法進行了總(zong)結，記得(de)給小編(bian)點個(ge)收(shou)藏hahaha~

物理介導——電穿孔(kong)法

原理(li)：電流能夠擊(ji)穿細(xi)胞膜形(xing)成瞬時(shi)的水通路或(huo)膜上小(xiao)孔促使DNA分子進入胞內。

優點：原理簡單；不(bu)需要(yao)載體。

缺點(dian)：需要(yao)特殊設備，電流對細胞傷害非常大。

化學介導——脂(zhi)質體轉染

原理：陽離子(zi)脂(zhi)質體表(biao)面(mian)帶(dai)正電(dian)荷，與(yu)核酸(suan)的磷酸(suan)根通過靜電(dian)作用，將DNA分子(zi)進行(xing)包裹，形成DNA脂(zhi)復合物，能被表(biao)面(mian)帶(dai)負電(dian)的細(xi)胞膜吸附，再通過細(xi)胞內吞進入細(xi)胞。

優點：操作(zuo)比較簡單，轉染效(xiao)率高。

缺點：需(xu)要進行條件優(you)化(hua)；有些細胞體系不易(yi)轉染；對血清敏感(gan)；價(jia)格較高。

化學介導——陽離子聚合物

原理：與脂質體轉染原理相似，都(dou)是利(li)用陽離子與核酸結合成復合物(wu)，利(li)用細(xi)胞內吞進(jin)入細(xi)胞內。

優點：在血(xue)清(qing)內穩定；對細胞毒(du)性相(xiang)對較低(di)；轉(zhuan)染率高；性價比高。

缺點(dian)：需要對體系(xi)(xi)進行條件(jian)優(you)化；有些細胞體系(xi)(xi)不易(yi)轉染。

生物介導(dao)——病毒感染(ran)

原理：通(tong)過侵染宿主細(xi)胞從而(er)將外(wai)源基因導入到細(xi)胞中。

優點：高轉染(ran)率；適用性廣。

缺點：需要對體系進行條(tiao)件(jian)優(you)化；需要構建病毒載(zai)體，步驟較(jiao)為(wei)復雜。

然而，一種方法不會適用于所有的細胞和實驗，理想的轉染方法應該根據自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉染方法應具有高轉染效率，低細胞毒性和對正常生理學的影響最小，且易于使用和可重復性等特點。

細胞轉染效率往往受到很多因素的影響，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮，所以細胞轉染是一個常規但并不簡單的實驗。在進行轉染實驗時，需要注意以下事項：

細胞狀態：確保(bao)細胞處(chu)于(yu)良(liang)好的生(sheng)長狀(zhuang)態，并在轉(zhuan)染前處(chu)于(yu)指數生(sheng)長期。

轉染試劑選擇：根(gen)據細(xi)胞(bao)類型和(he)實驗目的選擇適(shi)當的轉染(ran)試劑。

DNA/RNA質量：使用高質量的DNA或RNA，并確保(bao)其大小適宜。

轉染時間：根據細胞類(lei)型和轉染(ran)試(shi)劑確定(ding)最佳的(de)轉染(ran)時間。

健康細胞培養物和操作：保持細胞健(jian)康，避免RNA酶和其他污(wu)染源的(de)污(wu)染。

純化RNA：在轉染(ran)前，使用適當(dang)的方(fang)法純化RNA，以(yi)去除多余的核苷(gan)酸、小的寡核苷(gan)酸、蛋白和鹽離子(zi)。

避免RNA酶污染：確保(bao)實驗環境中沒有RNA酶，防止對實驗結果產生影響。

重復實驗：為了(le)確保實(shi)驗結果的可靠性(xing)和可重復性(xing)，需要進行多次重復實(shi)驗。

轉染效率檢測：轉染完成后(hou)需要對轉染效率進行(xing)(xing)檢(jian)測(ce)，對實驗數(shu)據進行(xing)(xing)正確(que)的分析和(he)解釋，避免因誤判而得出錯誤的結論(lun)。

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