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流式細胞儀的調試和校準方法

更新時間(jian)：2023-02-22

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 　　流(liu)式細胞(bao)儀是一(yi)種(zhong)用(yong)于分析細胞(bao)的(de)(de)技術，包括細胞(bao)計數、表(biao)型、細胞(bao)周期評(ping)估(gu)和生存能力。流(liu)式細胞(bao)儀中激光(guang)器產(chan)生的(de)(de)光(guang)被(bei)樣品中的(de)(de)細胞(bao)散射，由檢(jian)測器測量，然后轉化為(wei)可(ke)分析和測量的(de)(de)信號。
　　調試和校準
　　流(liu)式細胞儀在(zai)(zai)使用前，甚(shen)至在(zai)(zai)使用過程(cheng)中都要(yao)精心進(jin)行調試，以保(bao)證(zheng)工作的可(ke)靠性和最佳性。調試的項目(mu)主(zhu)要(yao)是(shi)激光(guang)強度、液流(liu)速度和測量區(qu)的光(guang)路(lu)等(deng)。
　　激(ji)光(guang)(guang)強(qiang)度：除(chu)調整反射鏡的(de)角(jiao)度以調整到(dao)所需波長的(de)激(ji)光(guang)(guang)出光(guang)(guang)外，還要結(jie)合顯示(shi)屏上(shang)的(de)光(guang)(guang)譜曲線使激(ji)光(guang)(guang)的(de)強(qiang)度輸出為最大。
　　液(ye)流速度(du)：可通過操作臺數字顯示(shi)監督，調節　氣(qi)體壓(ya)力大(da)小以(yi)獲得穩定(ding)的液(ye)流速度(du)。
　　測量(liang)區光(guang)(guang)路調節(jie)　：這(zhe)是調試工作的關鍵。需(xu)要(yao)保(bao)證(zheng)在測量(liang)區的液流、激光(guang)(guang)束、90散射(she)測量(liang)光(guang)(guang)電系(xi)統(tong)垂直正交，而且交點較小。一般可在用(yong)標準熒光(guang)(guang)微球等校準中完成。
　　流式細胞術中(zhong)(zhong)(zhong)所(suo)測(ce)得(de)的(de)量(liang)是(shi)(shi)相對(dui)值，因此(ci)需要(yao)在使(shi)用(yong)(yong)(yong)前或(huo)使(shi)用(yong)(yong)(yong)中(zhong)(zhong)(zhong)對(dui)系統進行(xing)校準(zhun)或(huo)標(biao)定(ding)，這樣才能(neng)(neng)通(tong)過(guo)相對(dui)測(ce)量(liang)獲得(de)絕(jue)對(dui)的(de)意義。因而FCM中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)校準(zhun)具有雙重功能(neng)(neng)：儀器(qi)的(de)準(zhun)直(zhi)調整和定(ding)量(liang)標(biao)度。標(biao)準(zhun)樣品(pin)(pin)應該穩定(ding)，有形(xing)成份形(xing)狀應是(shi)(shi)大小比較一(yi)致(zhi)球形(xing)，樣品(pin)(pin)分散性能(neng)(neng)良好，且經濟、容易(yi)獲得(de)。常(chang)用(yong)(yong)(yong)標(biao)準(zhun)熒光(guang)微(wei)球作為非生(sheng)物(wu)學標(biao)準(zhun)樣品(pin)(pin)，雞(ji)血(xue)紅(hong)細胞做為生(sheng)物(wu)學標(biao)準(zhun)樣品(pin)(pin)。微(wei)球用(yong)(yong)(yong)樹脂材料制作，或(huo)標(biao)有熒光(guang)素，或(huo)不標(biao)記熒光(guang)素。所(suo)用(yong)(yong)(yong)的(de)雞(ji)血(xue)紅(hong)細胞標(biao)準(zhun)樣品(pin)(pin)制作過(guo)程(cheng)昭下：取3.8%枸櫞酸或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)的(de)雞(ji)血(xue)（抗(kang)凝(ning)劑：雞(ji)血(xue)=1：4），經PBS清(qing)洗(xi)3次，再用(yong)(yong)(yong)5～10ml的(de)1.0%戊二(er)醛(quan)(quan)與(yu)清(qing)洗(xi)后的(de)雞(ji)紅(hong)細胞混合，室溫下振蕩醛(quan)(quan)化24h，最后經PBS再清(qing)洗(xi)，貯4℃冰箱中(zhong)(zhong)(zhong)備用(yong)(yong)(yong)。需要(yao)指(zhi)出的(de)是(shi)(shi)因為未經熒光(guang)染色，所(suo)測(ce)光(guang)信號為雞(ji)血(xue)紅(hong)蛋白(bai)的(de)自(zi)發熒光(guang)。