CHANG Amnio羊水培養基使用說明

原代培養：原位(wei)法

1. 將羊水低速離心以濃縮細胞。

2. 用少量病人(ren)自(zi)己的(de)羊水重懸細胞(bao)顆(ke)粒。例如，將10ml羊水紡絲上清吸(xi)至細胞(bao)顆(ke)粒上方0.5mL，再懸浮。在濃縮的(de)細胞(bao)懸液中加入足夠的(de)CHANG Amnio®，使最(zui)終鍍(du)液體積為每個蓋(gai)片(pian)0.5mL(共4個蓋(gai)片(pian))或每個小(xiao)瓶2mL。

3.在37°C、5%-8%的CO2大氣中(zhong)不受干擾(rao)地(di)培養。

4. 第2天淹水培(pei)養，加入2mL CHANG Amnio®。

5. 4 - 5天后(hou)，檢查培(pei)(pei)(pei)養(yang)物(wu)的(de)生長(chang)情(qing)況。一旦(dan)觀察(cha)到生長(chang)情(qing)況，應飼喂培(pei)(pei)(pei)養(yang)物(wu)。去除所有(you)培(pei)(pei)(pei)養(yang)上清，用2mL新鮮CHANG Amnio®替換(huan)培(pei)(pei)(pei)養(yang)物(wu)。建議以后(hou)每2天喂一次培(pei)(pei)(pei)養(yang)液。

6. 在第5天或之(zhi)后檢(jian)查培養物的(de)生長(chang)情(qing)況，當(dang)觀察(cha)到(dao)足(zu)夠(gou)的(de)菌落時采摘。

7. 結果是在收獲前一天用CHANG Amnio進行培養。

原代培養：培養瓶法

1. 將羊水低速離心以濃縮細胞。

2. 用少量病(bing)人自己的羊水重懸(xuan)細胞(bao)顆粒(li)。例如，將10mL羊水紡絲上(shang)清(qing)吸至細胞(bao)顆粒(li)上(shang)方1mL，再懸(xuan)浮。加入4mL CHANG Amnio，總體積為每(mei)瓶(ping)5mL。

3.在(zai)37°C、5%-8%的CO2大(da)氣(qi)中不受干擾地培養。

4. 第(di)5天(tian)檢查生長(chang)情況。用新鮮(xian)羊(yang)膜更換培養基，如果觀察到足夠(gou)的細胞(bao)生長(chang)就收割(ge)。

5. 檢查培(pei)養物的生長情況(kuang)，此后每(mei)天更換培(pei)養基，直(zhi)到(dao)觀察到(dao)足(zu)夠的菌落(luo)并準(zhun)備收獲。

6. 結果是在收獲前一天用CHANG Amnio進行培養。

傳代培養

要(yao)傳代細胞(bao)(bao)，用(yong)胰蛋(dan)白酶(或pronase，等等)處理培(pei)(pei)養(yang)物(wu)，就像你通常在(zai)傳統培(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)養(yang)細胞(bao)(bao)那(nei)樣。但(dan)是，應(ying)該仔細監測蛋(dan)白酶的(de)處理。在(zai)CHANG羊(yang)膜中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)養(yang)的(de)羊(yang)水細胞(bao)(bao)對蛋(dan)白酶的(de)敏感性高于(yu)在(zai)常規培(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)養(yang)的(de)羊(yang)水細胞(bao)(bao)。可能有必(bi)要(yao)修改(gai)您的(de)協議以(yi)考慮到這(zhe)一點。用(yong)于(yu)培(pei)(pei)養(yang)的(de)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)的(de)pH值必(bi)須(xu)在(zai)6.65-7.44之(zhi)間(即培(pei)(pei)養(yang)基(ji)必(bi)須(xu)是微黃的(de)鮭魚色)。pH值可以(yi)很(hen)容易地(di)調(diao)整(zheng)，只需將(jiang)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)放在(zai)5%-8%的(de)CO2培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)(zhong)，輕(qing)輕(qing)松開蓋子約30分(fen)鐘。

注:羊膜常形成草酸鈣晶體。這些晶體的存在(zai)尚(shang)未被證明(ming)會對(dui)產品性能造成任何不利影響。

華雅思創生物集團——Irvine Scientific代理

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